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細胞培養(yǎng)的步驟及其注意事項!
更新時間:2022-03-02瀏覽:1875次

  細胞培養(yǎng)的步驟及注意事項


  一、 復(fù)蘇

  1. 把凍存管從液氮中取出來,立即投入37℃水浴鍋中,輕微搖動。液體都融化后(大概1-1.5分鐘),拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。

  2. 把上述細胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細胞都洗下來),1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

  3. 把上清液倒掉,加1ml培養(yǎng)基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動,使培養(yǎng)皿中的細胞均勻分布。

  4. 標(biāo)好細胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等,放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細胞貼壁后換培養(yǎng)基。

  5. 3天換一次培養(yǎng)基。

  二、 傳代

  1. 培養(yǎng)皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。

  2. 把原有培養(yǎng)基吸掉。

  3. 加適當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌?能覆蓋細胞就行),消化1-2分鐘。

  4. 細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。

  5. 用移液槍吹打細胞,把細胞都懸浮起來。

  6. 把細胞吸到15ml的離心管中,1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

  7. 倒掉上清液,加1-2ml培養(yǎng)基,把細胞都吹起來。

  8. 根據(jù)細胞種類把細胞傳到幾個培養(yǎng)皿中。一般,癌細胞分5個,正常細胞傳3個。繼續(xù)培養(yǎng)。

  三、 凍存把細胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細胞懸浮起來,分裝到滅菌的凍存管中,靜止幾分鐘,寫明細胞種類,凍存日期。4℃ 30min,-20℃ 30min,-80℃過夜,然后放到液氮灌中保存。 凍存液的配制: 70%的*培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加,邊滴邊搖。

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