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　　實驗室細胞培養(yǎng)板如何選擇!

　　細胞培養(yǎng)板依底部形狀的不同可分為平底和圓底(U型和V型);培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384、1536 孔等;根據(jù)材質(zhì)的不同有Terasaki板和普通細胞培養(yǎng)板。具體選擇時根據(jù)培養(yǎng)細胞的類型、所需培養(yǎng)體積及不同的實驗?zāi)康亩ā?/p>

　　(一)平底和圓底(U型和V型)培養(yǎng)板的區(qū)別和選擇：

　　貼壁細胞一般用平底培養(yǎng)板。懸浮型細胞的培養(yǎng)一般用V型。

　　U型培養(yǎng)板亦多用于培養(yǎng)懸浮型細胞 。V型培養(yǎng)板有時用做免疫學(xué)血凝集的實驗。

　　細胞培養(yǎng)板主要是PS材料。材料是treated sufface。便于細胞貼壁生長與伸展。當(dāng)然還有浮游細胞的生長材料，同時還有l(wèi)ow binding surface，有關(guān)更多實驗材料上的應(yīng)用與對材料的選擇。

　　問：我想測吸光度用酶標(biāo)儀，用多孔細胞培養(yǎng)板行嗎?請問酶標(biāo)板 多孔細胞培養(yǎng)板有什么區(qū)別?

　　答：用多空細胞培養(yǎng)板測吸光度肯定可以拉，我們經(jīng)常用它來做樣品的蛋白定量和MTT檢測。

　　區(qū)別：酶標(biāo)板一般要比細胞培養(yǎng)板貴，細胞板主要做細胞培養(yǎng)，但也可以用來測蛋白濃度;酶標(biāo)板包括包被板和反應(yīng)板，一般不能用做細胞培養(yǎng)，它主要做免疫酶聯(lián)反應(yīng)后的蛋白檢測，它需要更高的要求還需要特定的酶標(biāo)工作液。如下是個用酶標(biāo)板檢測冠狀病毒IgM/IgG抗體例子：見網(wǎng)站

　　常用不同培養(yǎng)板的孔底面積及推薦加液量：不同孔板所加培養(yǎng)液的液面都不宜太深，一般在2-3mm范圍，結(jié)合不同孔的底面積就可算出各培養(yǎng)孔的適宜加液量。若加液量過多會影響氣體(氧氣)交換，而且在搬動過程中易溢出造成污染。具體所加細胞密度依實驗的目的不同靈活掌握。

　　培養(yǎng)器皿 面積(cm2)培養(yǎng)液量(ml) 細胞量

　　96 孔培養(yǎng)板 0.32 0.1 10e5

　　24孔培養(yǎng)板 2 1.0 5×10e5

　　12孔培養(yǎng)板 4.5 2.0 10e6

　　6孔培養(yǎng)板 9.6 2.5 2.5×10e6

　　3.5 cm 培養(yǎng)皿 8 3.0 2×10e6

　　6 cm 培養(yǎng)皿 21 5.0 5.2×10e6

　　10 cm 培養(yǎng)皿 55 10.0 13.7×10e6

　　25cm2 培養(yǎng)瓶 25 5.0 5×10e6

　　75cm2 培養(yǎng)瓶 75 15～30 2×10e7

　　(一)細胞培養(yǎng)板的密閉和污染問題：

　　細胞培養(yǎng)板的加樣和操作：細胞培養(yǎng)板在進行細胞操作時同樣遵循嚴(yán)格無菌的原則，各項操作要保證規(guī)范、科學(xué)，不對細胞的生長造成額外的影響。這其中最常見的問題就是如何保證加樣后細胞的均勻和盡量減少換液對細胞生長狀態(tài)的影響。

　　問：96，24孔培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿的蓋子都很松，這樣是方便了透氣，但是細菌、霉菌等污染物會不會也隨著溜進去呢?

　　答：1.蓋子很松，屬于半開放培養(yǎng)，這樣的目的是透氣(實際上是為了使培養(yǎng)皿外的co2能夠與培養(yǎng)皿充分交換，維持培養(yǎng)基的pH值)。

　　2.凡事有利必有弊，這樣當(dāng)然增加了污染的可能性。此外這樣還會使培養(yǎng)皿內(nèi)的液體蒸發(fā)，這對于精確定量的藥物來說就顯得值得注意了。所以以下二條措施是必須的a培養(yǎng)箱內(nèi)空氣必須清潔(定期紫外線照，酒精擦洗，盡量少開關(guān)培養(yǎng)箱)b培養(yǎng)箱內(nèi)的濕度必須始終保持為*(培養(yǎng)箱內(nèi)放置無菌蒸餾水的水槽)。

　　(二)細胞分布不均及解決辦法：

　　問：我的細胞接種培養(yǎng)板，細胞總是聚集在周邊部分，該如何處理啊?我看園子里有的戰(zhàn)友的細胞卻是聚集在中間，是不是板子的質(zhì)量問題啊?

　　答：請問你的細胞是如何混勻的?是滴管吹打還是振蕩培養(yǎng)板?如果是后者，而且是轉(zhuǎn)圈搖勻的話，很有可能由于離心力的作用使細胞甩到周邊部分，導(dǎo)致細胞中間少，四周多!自己可是試試!

　　周邊一般是相對會多一點，但是中間的數(shù)量也不會很少啊~~ 鋪板的時候我也沒有特異去振蕩培養(yǎng)板。

　　(三)6孔板接種和換液：

　　問：我的細胞傳代很正常，但一種到六孔板里(不管加藥和對照)，總有兩三個孔(隨機)細胞長得不好，很小，像破碎了。有人遇到過這種情況嗎?到底是啥原因呢?請各位指點

　　答：可能跟你加液的溫度有關(guān)。如果你細胞剛剛拿出來換液加液，培養(yǎng)基也是從4度冰箱拿出來不久，很容易細胞就會凍死了。建議你最好把培養(yǎng)基先在培養(yǎng)箱里邊孵育15min先。

　　(四)24孔板接種：

　　問：我把細胞消化接種到24孔板之后，已經(jīng)四天了，老是每孔的中間部分長不滿，每天換液時都用PBS 清洗，第二天換液時都出現(xiàn)同樣的情況，每孔的邊緣長的很好，中央大量死細胞，是什么原因!

　　答：是中央長不滿，還是中央有和邊緣相同密度的細胞，但是大部分都是死細胞?如果是前者，也許不是技術(shù)問題，而是物理問題了。

　　我是選擇孔內(nèi)鋪蓋玻片，在玻片上種植。每次換液都用PBS洗，必要的步驟嗎?另外，也有可能和細胞種類有關(guān)或者和培養(yǎng)液有關(guān)?

　　我想你的培養(yǎng)液可能加的太少了。由于表面張力的作用，培養(yǎng)板的邊緣液體會向上走，造成培養(yǎng)液面呈現(xiàn)一個凹面(就像量筒的液體凹面一樣)，中央的細胞正好在凹面的處，培養(yǎng)液少，細胞的營養(yǎng)不夠，甚至干涸掉，空氣中的氧氣也會造成損傷，即使有增值過來的細胞也會死掉。

　　經(jīng)驗：

　　1.所有待接種的細胞懸液在種板前一定要用吸管混勻。

　　2.按資料記載，24孔板的液體量為1ml，個人也覺得1ml的量足矣。

　　3.接種時，要慢慢加樣，且記得輕微旋轉(zhuǎn)槍頭，這樣做對細胞均勻分布有一定效果。

　　4.接種后最好直接放入培養(yǎng)箱讓細胞適應(yīng)培養(yǎng)板這個新的環(huán)境，個人認為沒有必要在室溫放置一段時間。

　　5.根據(jù)細胞的特性，細胞均喜歡聚集在邊緣生長，所以我考慮到，你的問題還有可能是接種時的細胞密度不夠，導(dǎo)致周邊密集，中間稀疏的錯覺。你的拌種密度是多少?

　　另"要慢慢加樣，且記得輕微旋轉(zhuǎn)槍頭"的意思就是:加樣不能太快，避免細胞在一個加樣處聚集，且注意在不同的部位進行加樣，即邊加邊活動槍頭，人為使細胞趨于均勻分布，我個人覺得有一定的效果，不知這次我解釋清楚沒有。

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