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凍存過的全血為什么不建議再拿來做ELISA實(shí)驗(yàn)?
很多ELISA實(shí)驗(yàn)新手客戶都會(huì)咨詢我司技術(shù)能否把全血提取出來放-70℃條件保存,等實(shí)驗(yàn)開展了(比如一個(gè)月左右的時(shí)間)再離心全血取血清或者血漿做ELISA實(shí)驗(yàn)?這種做法我司技術(shù)都是持反對建議的。與此同時(shí),也是明確要求我司銷售人員在與客戶售前溝通時(shí)建議老師全血樣本提取好了應(yīng)該及時(shí)離心出血清或者血漿。并要求-70℃條件下保存,如果一個(gè)月左右可以開展實(shí)驗(yàn)可以-20℃保存,期間不能反復(fù)凍融。至于凍存后的全血不可以再提取血清、血漿樣本來做elisa的具體原因如下:
1.全血凍存后解凍,用常規(guī)離心方式提取血清仍然是可以的,不利的一點(diǎn)是,伴隨凍融的過程,會(huì)出現(xiàn)比較嚴(yán)重的溶血事件。而后提取出來的血清能否做elisa,主要取決于溶血程度、你所要檢測的目標(biāo)蛋白的性質(zhì)及你實(shí)驗(yàn)的目的。
2.溶血釋放的胞內(nèi)組分往往容易影響本底,甚至出現(xiàn)假陽性;而蛋白酶的釋放可能導(dǎo)致目的蛋白的降解影響結(jié)果;目的蛋白的大小、穩(wěn)定性、特異性(相對抗體而言)又影響其自身與酶標(biāo)板的吸附、自身降解、自身與抗體的結(jié)合率等等。以上各種不確定性因素存在下,如果你只是對血清中某種血清蛋白做定性檢測的話,做elisa應(yīng)該問題不大;若是定量分析的話,從可靠性的角度上看,不建議該做法。
elisa試劑盒需求多少血樣?
1.請問每孔需求多少ul血清,其他,比如說需求100ul血清,那么需求留取多少人抗凝血呢?一般常用的ELISA試劑盒有96孔,根據(jù)試驗(yàn)需求做復(fù)孔,陰性、陽性對照組。復(fù)孔一般設(shè)3孔。
2.試驗(yàn)都是取5ML的抗凝血離心后取血清,能夠得到許多血清。然后分裝到EP管凍存,然后取一部分來做ELISA試劑盒,其他的做其他試驗(yàn)用。
3.需求的樣本量取決于你的檢查項(xiàng)目,有些檢查項(xiàng)目需求血清做1:100稀釋,乃至是更高的稀釋度,那么幾微升血樣就夠了,有些項(xiàng)目只能做較低的稀釋,乃至不稀釋,這么的話每孔會(huì)需求100ul分配.
關(guān)于抗凝血和得到的聯(lián)絡(luò),大致上份額是1毫升全血能夠得到500ul血清或血漿.我血樣是現(xiàn)已把細(xì)胞分離出來了的,現(xiàn)要提DNA,試劑盒上說"取0.3-0.5ml全血到1ml純化樹脂中",應(yīng)取多少μl細(xì)胞?
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