熒光定量PCR耗材具有很高的純凈度和穩(wěn)定性,能更好適應(yīng)PCR反應(yīng)過程中反復(fù)高低溫設(shè)定,并且能夠?qū)崿F(xiàn)高溫高壓滅菌操作,常常被用于PCR耗材的生產(chǎn)。隨著熒光定量PCR技術(shù)的普及,該技術(shù)被廣泛用于遺傳、生化、免疫、醫(yī)藥等領(lǐng)域,不僅應(yīng)用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎(chǔ)研究,還可用于疾病的診斷或任何有DNA,RNA的研究領(lǐng)域。
熒光定量PCR耗材的使用方法如下:
1、PCR板有透明和乳白色可選,其中乳白色更適合用于頂部采集熒光信號的新型熒光定量PCR儀(如伯樂CFX系列,ABI7500fast以上型號,Roche480系列),但如果熒光定量PCR儀是底部光源的,則應(yīng)選擇透明的。
2、PCR板根據(jù)裙邊設(shè)計又可分為無裙邊、半裙邊和全裙邊三種設(shè)計模式,不同廠家的熒光定量PCR儀會設(shè)計不同的切角或邊緣凸起,請選擇適合該PCR儀的板子。
3、PCR板又分100ul體積(矮板)和200ul體積(高板),根據(jù)機型的不同選擇,選擇不同高度孔板,避免高度錯誤對機器造成破壞和加熱不均導(dǎo)致數(shù)據(jù)失真。
4、當(dāng)使用96孔板做熒光定量PCR實驗的時候,推薦使用光學(xué)膜代來密封反應(yīng)孔。
5、加樣后會在管壁上飛濺一些小液滴,另外反應(yīng)體系內(nèi)也會有一些氣泡,需要離心去掉掛壁液滴和氣泡。請使用專用的微孔板離心機解決上述問題。
6、PCR板屬于一次性消耗品,生產(chǎn)一次成型,不建議剪開使用容易造成實驗誤差增加,不能清洗或部分重復(fù)利用。不要為了節(jié)省一點小錢,而給實驗帶來后續(xù)分析上的困擾。